
微生物的生長繁殖依賴于適宜的營養(yǎng)環(huán)境與培養(yǎng)條件,其中培養(yǎng)基作為微生物獲取營養(yǎng)的核心載體,其制備過程(融化、滅菌、保溫)的規(guī)范性直接決定實驗結(jié)果的可靠性。在固體培養(yǎng)基(如瓊脂培養(yǎng)基)的使用中,需先將凝固的培養(yǎng)基徹底融化并保持適宜溫度,避免溫度過高破壞營養(yǎng)成分或溫度過低導致培養(yǎng)基提前凝固;而液體培養(yǎng)基在接種后若需階段性培養(yǎng),也需穩(wěn)定的保溫環(huán)境維持微生物代謝活性。
傳統(tǒng)電熱恒溫水浴鍋普遍存在加熱不均勻、溫度波動大、融化效率低等問題,易導致培養(yǎng)基局部過熱碳化或融化不徹底,進而影響微生物生長。博清生物科技(南京)有限公司作為生物實驗設備專業(yè)制造商,其研發(fā)的電熱恒溫水浴鍋采用了多組加熱管環(huán)繞布局與智能溫度控制系統(tǒng),理論上可優(yōu)化培養(yǎng)基處理效果。
一、材料與方法
(一)實驗材料
1、設備
博清生物電熱恒溫水浴鍋;對照設備為普通品牌電熱恒溫水浴鍋;電子天平;數(shù)顯溫度計;無菌操作臺;恒溫培養(yǎng)箱。
2、培養(yǎng)基與菌株
LB固體培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl 10g/L、瓊脂15g/L,pH 7.0);馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA,馬鈴薯200g/L、葡萄糖20g/L、瓊脂15g/L,pH 5.6);大腸桿菌(E.coli DH5α);釀酒酵母(S.cerevisiae CICC 1001)。
(二)實驗方法
1、培養(yǎng)基融化效率與均勻性測定
分別取凝固的LB培養(yǎng)基與PDA培養(yǎng)基各500mL(分裝于500mL 三角瓶中),置于博清生物電熱恒溫水浴鍋與普通水浴鍋中,設置融化溫度為95℃,記錄從開始加熱至培養(yǎng)基完全融化(無固體顆粒)的時間,每組實驗重復3次,計算平均值。
同時,在培養(yǎng)基融化過程中,采用數(shù)顯溫度計分別測定三角瓶內(nèi)上(液面下2cm)、中(液面下5cm)、下(瓶底上2cm)三個位置的溫度,記錄融化完成時各點溫度差值,評估融化均勻性。
2、培養(yǎng)基保溫穩(wěn)定性測定
將完全融化的LB培養(yǎng)基與PDA 培養(yǎng)基分別置于博清生物電熱恒溫水浴鍋中,設置保溫溫度(LB培養(yǎng)基37℃、PDA培養(yǎng)基45℃),連續(xù)監(jiān)測24h,每1h記錄一次水浴溫度,計算溫度波動范圍。
3、微生物培養(yǎng)效果驗證
將經(jīng)博清生物水浴鍋融化并保溫的LB培養(yǎng)基(37℃)、PDA培養(yǎng)基(45℃)分別倒平板,待凝固后接種大腸桿菌(10^6 CFU/mL)與釀酒酵母(10^6 CFU/mL),每平板接種100μL,涂布均勻后置于恒溫培養(yǎng)箱(大腸桿菌37℃、釀酒酵母28℃)培養(yǎng)24h。以普通水浴鍋處理的培養(yǎng)基為對照,采用平板計數(shù)法統(tǒng)計菌落數(shù),計算菌落形成單位(CFU),評估微生物生長情況;同時測定培養(yǎng)后微生物的OD600值(采用紫外分光光度計),分析菌體密度差異。
(一)培養(yǎng)基融化效率對比
在95℃融化條件下,博清生物電熱恒溫水浴鍋對LB培養(yǎng)基與PDA培養(yǎng)基的融化效率顯著高于普通水浴鍋。其中,LB培養(yǎng)基500mL平均融化時間為28.6min,較普通水浴鍋(32.6min)縮短12.3%;PDA培養(yǎng)基因含馬鈴薯淀粉,融化難度更高,博清設備融化時間為35.2min,較普通水浴鍋(40.5min)縮短13.1%。這一結(jié)果表明,博清生物水浴鍋的多組環(huán)繞加熱設計可提升熱量傳遞效率,加速培養(yǎng)基融化。
(二)培養(yǎng)基融化均勻性分析
融化完成時,博清生物水浴鍋處理的培養(yǎng)基內(nèi)部溫度差異顯著小于普通水浴鍋。對于LB培養(yǎng)基,博清設備處理后上、中、下三點溫度差值為0.8℃,而普通水浴鍋為2.3℃;PDA培養(yǎng)基中,博清設備的溫度差值為1.0℃,普通水浴鍋為2.8℃。溫度分布均勻可避免培養(yǎng)基局部過熱導致的營養(yǎng)成分破壞(如酵母提取物中熱敏性物質(zhì)失活),同時防止局部未融化的瓊脂顆粒影響平板制備質(zhì)量。
(三)培養(yǎng)基保溫穩(wěn)定性結(jié)果
連續(xù)24h保溫監(jiān)測顯示,博清生物電熱恒溫水浴鍋在37℃(LB培養(yǎng)基保溫)與45℃(PDA培養(yǎng)基保溫)條件下,溫度波動范圍均≤±0.5℃,且全程無明顯溫度漂移;而普通水浴鍋在相同條件下,溫度波動范圍為±1.2-1.5℃,且在12h后出現(xiàn)0.8℃的溫度漂移。穩(wěn)定的保溫環(huán)境可確保液體培養(yǎng)基在接種前維持適宜溫度,避免因溫度波動導致微生物接種后適應期延長,或固體培養(yǎng)基倒平板時提前凝固。
(四)微生物培養(yǎng)效果
采用博清生物水浴鍋處理的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌與釀酒酵母時,菌落數(shù)與OD600值均顯著高于普通水浴鍋組。其中,大腸桿菌CFU較對照組提升18.5%,OD600值提升15.2%;釀酒酵母CFU提升16.3%,OD600值提升13.8%。這一結(jié)果表明,博清設備處理的培養(yǎng)基營養(yǎng)保留更完整、狀態(tài)更穩(wěn)定,可為微生物生長提供更優(yōu)環(huán)境,提升培養(yǎng)效果的重復性與準確性。
三、討論
本研究證實,博清生物科技(南京)有限公司研發(fā)的電熱恒溫水浴鍋在微生物培養(yǎng)基融化與保溫中具有顯著優(yōu)勢,其核心原因在于:(1)多組加熱管環(huán)繞布局結(jié)合高效熱傳導材質(zhì),提升了熱量分布均勻性,避免局部溫差過大;(2)智能PID溫度控制系統(tǒng)可實時監(jiān)測并調(diào)整溫度,確保保溫過程中溫度波動控制在極小范圍,減少溫度變化對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的影響;(3)較大的水浴容積與合理的內(nèi)部結(jié)構(gòu)設計,可同時處理多份培養(yǎng)基,提升實驗效率,適合高通量微生物培養(yǎng)實驗。
對比普通水浴鍋,博清生物設備不僅縮短了培養(yǎng)基融化時間,還通過優(yōu)化溫度穩(wěn)定性,間接提升了微生物培養(yǎng)效果。在實際應用中,該設備可滿足不同類型培養(yǎng)基的處理需求,尤其適用于對培養(yǎng)條件要求嚴苛的實驗。此外,設備操作簡便、故障率低,可降低實驗人員的操作復雜度,進一步保障實驗流程的標準化。
需注意的是,本研究僅針對常見的LB培養(yǎng)基與PDA培養(yǎng)基,對于高黏度、特殊成分的培養(yǎng)基,其融化與保溫效果仍需進一步驗證;同時,后續(xù)可結(jié)合自動化控制系統(tǒng),實現(xiàn)培養(yǎng)基融化-保溫-倒平板的一體化操作,進一步提升實驗效率。
博清生物科技(南京)有限公司電熱恒溫水浴鍋在微生物培養(yǎng)基融化過程中,具有效率高、均勻性好的優(yōu)勢,可縮短融化時間12%-13%,且培養(yǎng)基內(nèi)部溫度差值≤1.0℃;在保溫過程中,溫度波動范圍≤±0.5℃,穩(wěn)定性顯著優(yōu)于普通水浴鍋。該設備可通過優(yōu)化培養(yǎng)基處理質(zhì)量,提升微生物培養(yǎng)的菌落數(shù)與菌體密度,為微生物學實驗提供可靠的設備支持。綜上,博清生物科技(南京)有限公司電熱恒溫水浴鍋是微生物培養(yǎng)中培養(yǎng)基融化與保溫的理想設備,值得在科研、生產(chǎn)領域推廣應用。
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